弦華生物SpCas9 蛋白

貨號:GB0010

英文名稱:SpCas9 Recombinant Protein

產品規格:50 pmol   250 pmol  100 pmol   1000 pmol
【產品介紹】

來源：通過E.coli重組、表達、純化而獲得，表達基因來源于Streptococcus pyogenes。在其編碼蛋白的 N 端含有猴病毒 40（SV40）核定位序列（NLS），同時帶有 10*His 標簽。

用途：體外篩選高效gRNA序列、特定雙鏈DNA在gRNA引導下的剪切、含有特定序列雙鏈DNA的選擇性線性化等。

純度：不含DNA外切酶，不含非gRNA依賴的DNA內切酶，不含RNA酶。

濃度：1μM(158ng/μl)。

【注意事項】（操作前仔細閱讀）

1. 本產品使用時會涉及sgRNA和DNA的操作，必須注意RNase-free和DNase-free的相關操作。所有自行準備的試劑和耗材也都應是Nuclease-free的。如果可能有核酸酶污染，可考慮用0.01%的DEPC處理過夜，然后高溫高壓處理后使用。操作時建議戴一次性口罩操作。

2. 對于操作環境中核酸酶的去除，推薦使用RNase and DNase接觸面上的核酸酶。反應體系中推薦加入以去除實驗桌、儀器設備等表面或其它RNase Inhibitor以保護RNA不被降解。

3. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

【使用說明】

1. 溶解并混勻體外消化反應所需的各種溶液。將SpCas9、sgRNA、底物DNA置于冰浴上，使用無核酸酶水稀釋sgRNA至300nM，底物DNA至30nM。

2. 按照下表配制反應體系(以30μl Reagent體系為例)：

3. 用移液器輕輕吹打混勻或輕微渦旋混勻，室溫離心數秒，使液體積聚于管底。25℃預孵育10min。

4. 加入3μl 30nM底物靶DNA(30μl最終體積)，輕輕混勻(用移液器輕輕吹打混勻或用渦旋混合器在速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體，37℃孵育15min，反應時間可以根據實際情況適當延長至例如30-120min。

5. 每個樣品中加入1μl蛋白酶K，輕輕混勻，室溫孵育10min。

每個反應體系中加入 DNA上樣緩沖液，然后使用適當濃度的瓊脂糖凝膠進行電泳分析。如果不立即電泳，可以-20oC保存備用。

【存儲及保存】

酶儲存溶液：10mM Tris, 300mM NaCl, 0.1mM EDTA,1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol, pH7.4 25oC。

Cas9 Reaction Buffer(10X): 500mM Tris-HCl, 1M NaCl, 100mM MgCl2, 1mg/ml BSA, pH7.9 25oC

弦華生物SpCas9 蛋白【存放說明】

-20oC保存，至少一年有效。可以分裝后在-80oC長期保存。